Altogen Biosystems轉(zhuǎn)染試劑的相關(guān)知識普及
2019-09-17 點擊：2402
隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷深入，DNA轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)實驗工具。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生命科學前沿研究中，應用越來越廣泛。Altogen Biosystems轉(zhuǎn)染試劑能夠利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒DNA，通過直接穿膜或膜融合的方法，將外源DNA分子導入真核細胞，使外源基因表達，從而針對某個基因和蛋白質(zhì)的功能進行一系列生物學功能研究的方法。
轉(zhuǎn)染效率的確定，常用的是使用熒光定量PCR、熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測等方法。標準無疑是檢測目標基因的mRNA水平，因為轉(zhuǎn)染試劑不僅要把質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染進入細胞，還應及時把轉(zhuǎn)入細胞的DNA釋放出來，發(fā)揮基因表達或基因調(diào)控的作用。通過熒光顯微鏡判斷轉(zhuǎn)染效率至少存在兩方面的問題：1、熒光顯微鏡看到的熒光點可能是非特異吸附的結(jié)果；2、有些轉(zhuǎn)染試劑能夠?qū)①|(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染入細胞，但不能充分釋放，導致基因表達或基因調(diào)控效率并不高。因而，判斷Altogen Biosystems轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率的金標準應該是熒光定量檢測mRNA水平，僅靠觀察熒光顯微鏡判斷轉(zhuǎn)染效率、選擇轉(zhuǎn)染試劑往往會導致誤判，影響實驗的進展。
質(zhì)粒質(zhì)量：請務必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)毒素質(zhì)粒。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應該在1.8～2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。
細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。
